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獲1993年度云南省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)

獲獎(jiǎng)?wù)撸河辔南?/SPAN>  余 蕾  李菊升  李崇珍  李學(xué)忠

云南省瘧疾防治研究所

 

自從1975年Kohler和Milstein建立細(xì)胞雜交瘤技術(shù)以來(lái)，單克隆抗體(McAb)，以它極大的優(yōu)勢(shì)，在生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。七十年代末，國(guó)外開(kāi)始生產(chǎn)出各種寄生蟲(chóng)抗原的McAb，用于寄生蟲(chóng)抗原的檢測(cè)。1982年Zavala等首先報(bào)導(dǎo)子孢子McAb 作放射免疫檢測(cè)蚊體子孢子抗原獲得成功，后改用ELISA方法， 九十年代初已成功應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)，證實(shí)是一種快速檢測(cè)蚊媒的有效方法，可以極大地提高監(jiān)測(cè)媒介按蚊的效率， 對(duì)科學(xué)地指導(dǎo)蚊媒防除，促進(jìn)瘧防工作有很大意義。

我們從1989年起開(kāi)展了抗間日瘧子孢子單克隆抗體的研制工作， 主要以子孢子抗原的制備、小鼠骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)、BACB/C小鼠的飼養(yǎng)、子孢子抗原片的制備，用子孢子免疫小鼠后提取抗體效價(jià)達(dá)1:640 之小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞在聚乙二醇作用下進(jìn)行細(xì)胞融合培養(yǎng)。結(jié)果在細(xì)胞融合后分種的48孔中，26孔有雜交瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，融合率為54%。用雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行抗體檢測(cè)，有15孔呈陽(yáng)性反應(yīng)，占58%。采用IFA 方法篩選陰性孔，經(jīng)有限稀釋法克隆5次，建立了8株分泌抗子孢子單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，其培養(yǎng)上清抗體(IFA)效價(jià)為1:4，擴(kuò)大培養(yǎng)后注入同系小鼠腹腔誘生的腹水， 抗體效價(jià)為1:40。并對(duì)隨機(jī)抽取的52D11-D10株經(jīng)(NH4)₂SO₄)沉淀后4℃存4個(gè)月)進(jìn)行鑒定，經(jīng)過(guò)Protein-A親和層析后，收集物蛋白含量0.263mg/ml；2gG類別： 用小鼠IgG、IgM、IgA作雙擴(kuò)試驗(yàn)，結(jié)果只在IgG之間出現(xiàn)免疫沉淀線；純度：用SDS-PHGE 作凝膠電泳，只有單一的IgG重、輕鏈區(qū)帶。免疫效價(jià)：作瓊脂雙擴(kuò)試驗(yàn)， 終點(diǎn)滴度達(dá)1:64(一般MCAb1:4即為陽(yáng)性)。特異性：用Pf、PC、PV子孢子作成抗原片，同時(shí)作IFA試驗(yàn)，結(jié)果只有子孢子呈陽(yáng)性反應(yīng)。細(xì)胞學(xué)檢測(cè)：所培養(yǎng)得到的8株陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞， 都經(jīng)過(guò)雜色體檢查，結(jié)果平均染色體數(shù)目為80-110條，(瘤細(xì)胞染色體數(shù)目平均72條)。以上數(shù)據(jù)證實(shí)，被檢的52D11-D10株分泌的蛋白，確實(shí)是抗間日瘧子孢子單克隆抗體。

蚊媒子孢子自然感染調(diào)查，傳統(tǒng)的方法是靠單個(gè)蚊蟲(chóng)唾腺解剖來(lái)確定，技術(shù)要求高， 而且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，檢出率低，對(duì)整個(gè)媒介檢測(cè)受到限制， 子孢子單克隆抗體的研制成功可替?zhèn)鹘y(tǒng)的解剖唾腺方法，為提高疫情監(jiān)測(cè)水平，指導(dǎo)按蚊防除， 完善現(xiàn)有抗瘧措施，探索瘧疾自動(dòng)免疫療法，開(kāi)辟了廣闊前景。

 

執(zhí)筆整理：李菊升

 

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