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獲云南省衛(wèi)生廳1983年成果推廣三等獎

獲得者：李學忠  余文祥  金淑仙  楊品芳

云南省瘧疾防治研究所

應(yīng)用間接熒光抗體試驗進行血清流行病學調(diào)查，是近十多年來興起的一項新技術(shù)。通過多年來各地應(yīng)用和實驗證明，本法可以在瘧疾防治后期，人群帶蟲率及帶蟲密度均下降到很低的水平。用傳統(tǒng)的鏡檢方法其靈敏性已不適應(yīng)這一階段的需要時，應(yīng)用血清學的方法可以幫助查出可疑的傳染源；用以測定不同瘧區(qū)流行的水平或傳播強度；評價防治措施的效果；還可以通過連續(xù)調(diào)查監(jiān)測瘧疾流行的動態(tài)。

為適應(yīng)我省現(xiàn)階段瘧疾防治工作的需要，自1978年以來，在全省各重點瘧區(qū)縣逐步推廣應(yīng)用間接熒光抗體試驗。但此項試驗的主要材料，動物抗人IgG熒光抗體和食蟹猴瘧原蟲抗原片需從省外購買。不僅來源困難，且經(jīng)長途運輸使抗原抗體活性受到不同程度的影響。為解決我省廣大瘧區(qū)擴大應(yīng)用這一項新技術(shù)，我們從生產(chǎn)主要試劑、培訓技術(shù)干部，以及應(yīng)用等方面進行了工作，現(xiàn)將推廣過程中的情況小結(jié)如下：

材料和方法

2             試劑生產(chǎn)：

    1、包括人IgG抗人IgG的制備，采用常規(guī)的飽和硫酸銨沉淀法粗提丙球后過DEAE陰離子交換劑提純，用紫外光吸收法測定含量，以聚丙烯酰胺凝膠電泳或醋酸纖維膜電泳測定純度，用攪拌法進行標記；

    2、抗原片生產(chǎn)，國內(nèi)尚無商品供應(yīng)，為保證我省開展此方法作為監(jiān)測手段，按北方五省熒光抗體試驗常規(guī)的技術(shù)規(guī)程批量生產(chǎn)P.cynomolgi洗滌抗原片。

    以上試劑均按常規(guī)進行質(zhì)量鑒定，并與上海生物制品研究所同年生產(chǎn)的同類產(chǎn)品進行比較。

二、技術(shù)推廣措施：

1         舉辦培訓班；

2         接收進修；

3         本所開展應(yīng)用方面的研究總結(jié)經(jīng)驗加以推廣。

三、各地在應(yīng)用中逐步提高使用水平

結(jié)果和討論

間接熒光抗體試驗(IFAT)是一項靈敏性高的免疫診斷方法，已為國內(nèi)外普遍使用。欲在全省范圍內(nèi)推廣，首先要解決主要試劑和設(shè)備的供應(yīng)以及技術(shù)的掌握和應(yīng)用兩個主要問題。由于省外購買熒光抗體較為困難及抗原片國內(nèi)尚無商品供應(yīng)，為此，我們在省內(nèi)首次開始生產(chǎn)這兩種試劑，經(jīng)鑒定每批生產(chǎn)的IgG 含量均在20mg/ml以上。抗人IgG免疫療程滿后，用環(huán)狀沉淀試驗及雙向擴散法測定效價，均在1：128時才放血制備，與上海生物研究所同年同類產(chǎn)品比較，達到同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

另外洗滌抗原片每次制備完畢，均用參考陽性血清及陰性血清測試，無假陽性及假陰性反應(yīng)。[NextPage]

一、為了推廣這一試驗，自1979年以來先后舉辦訓練班四次，培訓了200余人，并先后接受來所專門進修這項技術(shù)的有100余人。另外如德宏州、保山地區(qū)、文山州、 臨滄、思茅、西雙版納、楚雄、玉溪、昭通以及曲靖等地、州的30余個瘧區(qū)重點縣先后不同程度地開展了該項試驗。

二、通過培訓，我所及各地在現(xiàn)場應(yīng)用中，積累了一定經(jīng)驗，得到大量數(shù)據(jù)，對調(diào)查和指導防治以及考核等方面，起到了積極作用，表現(xiàn)在以下幾個方面：

1、對評價防治效果，監(jiān)測瘧疾動態(tài)方面起到了積極作用：如昭通地區(qū)1982年6至11月在綏江縣結(jié)合傳統(tǒng)的瘧疾調(diào)查方法進行分層調(diào)查同時作了2600余人的IFA試驗，結(jié)果證實瘧疾實際流行量遠大于疫情報告的發(fā)病率，并通過與傳統(tǒng)的瘧疾流行病學調(diào)查相繼結(jié)合分析，證實當?shù)厝杂行赂腥敬嬖冢懠矀鞑ピ诋敃r防治措施的壓力下受到一定程度的阻滯，并預(yù)測如果放松措施，3至5內(nèi)年將會引起瘧疾回升，1984年該縣發(fā)病回升證實了這一預(yù)測。玉溪地區(qū)于1982年在峨山、易門、華寧3個縣的重點瘧區(qū)考核防治效果，用傳統(tǒng)的血檢共查1552人，鏡檢全部陰性，同時所查的1552人的間接熒光抗體試驗，抗體陽性32人，陽性率為2.06%，但全部均在1：40以下，進一步證實防治效果的質(zhì)量是好的。保山縣1981年流行季節(jié)前、后對7個公社18個生產(chǎn)隊1個農(nóng)場進行兩次調(diào)查，第一次查2072人，抗體陽性率下降為1.4%，證實防治措施是落實的，對滅瘧進入后期的地區(qū)、原蟲率極低的情況下應(yīng)用IFAT是可以增加監(jiān)測的靈敏度。

2、作為清查病灶點是一項有用的輔助方法：我所于1978年在勐海縣進行瘧疾防治效果考核中涂血片鏡檢26000余人份，占全縣總?cè)丝跀?shù)的9%左右，發(fā)現(xiàn)35例帶蟲者，但由于涂血人數(shù)多，鏡檢人員水平參差不一，加之制片、保存、染色等環(huán)節(jié)的影響、錯漏難免，通過其中1000余人份的IFA試驗，就在原血未檢查到原蟲的村寨中發(fā)現(xiàn)高滴度陽性患者，經(jīng)再次采血鏡檢發(fā)出了帶蟲者，彌補了鏡檢漏檢的不足。臨滄地區(qū)1982年在全區(qū)4個重點縣的23個點進行調(diào)查，共檢2397人，如僅以當時的原蟲率為0.38%推算分析，可以認為這些點瘧疾流行不嚴重，但是結(jié)合血清學方法調(diào)查，抗體陽性率為4.21%，而且不少村點陽性率仍高達30%以上并有高滴度陽性的患者存在，從而判斷了這些點是病灶點，并及時采取措施消除了隱患。西雙版納勐臘縣對一些外地遷入的新居民點發(fā)生暴發(fā)流行經(jīng)控制后進行效果考核，調(diào)查當時原蟲率0.1%以下，但IFA試驗抗體陽性率高達70%，陽性GMRT在1：40以上，高滴度陽性仍占相當比例，連續(xù)調(diào)查結(jié)果，流行季節(jié)后抗體水平較流行前升高，證實當?shù)亓餍腥晕辞袛啵餍袟l件繼續(xù)存在，這一結(jié)果表明在藥物作用下血中原蟲暫時隱匿，IFA試驗可以較靈敏地反應(yīng)流行的情況，增加了判斷防治效果和當時流行的情況敏感性。普洱縣1983年對413例發(fā)熱病人在進行病原學檢查的同時作IFA試驗，其中在流動人群40人中IFA陽性27人，陽性GMRT達84.21%，而非流行人群313人中僅有陽性12人，GMRT為28.28%，并對這413例發(fā)熱病人用原蟲鏡檢，間接熒光抗體試驗，臨床診斷三種方法所得數(shù)據(jù)進行比較，結(jié)果表明IFA試驗結(jié)合病原學檢查及臨床診斷，更能最大限度地發(fā)現(xiàn)發(fā)熱病人中的瘧疾患者。

3、積累了不同種瘧疾患者以及不同類型瘧區(qū)已經(jīng)防治后抗體變化的規(guī)律，為防治提供了較可靠的依據(jù)：1979年我所對22例惡性瘧患者經(jīng)根治連續(xù)追蹤觀察一年，提出惡性瘧根治后抗體消失的規(guī)律是：發(fā)病時抗體陽性率為95.4%(最高1：2500，最低1：40)，根治后抗體水平迅速下降，尤以120—150天下降幅度最大，至210—240天陰轉(zhuǎn)13例（61.9%），其余雖仍保持陽性，但滴度均在1：40以下。1984年先后對42例志愿受試者接種了間日瘧，從接種前，原蟲出現(xiàn)前期，癥狀發(fā)作時以及根治后不同時間或在復發(fā)時只給予一次氯喹標準療程后在各次復發(fā)時進行血檢和平行作IFA試驗，結(jié)果接種原蟲至原蟲出現(xiàn)前期，37例中有18例出現(xiàn)抗體（48%），根治后抗體迅速下降，第2月起陽性率由發(fā)作時的93.3%降至85.3%，至第7個月抗體消失。不根治組，凡復發(fā)病例在癥狀發(fā)作時抗體已升至相當高度，絕大多數(shù)均在1：80以上。

我所于1979年對一個以惡性瘧為主（占陽性數(shù)95%）的暴發(fā)流行點進行了縱向觀察，歷時16個月，暴發(fā)時原蟲率59.6%抗體陽性率90.6%，陽性GMRT為1：232半年后原蟲率降至2.8%，抗體陽性降至14.8%，陽性GMRT降至54.9，一年后原蟲降至0，但抗體陽性率仍保持17.5%，陽性GMRT為41.1，高滴度患者仍占一定比例，該項試驗可出用IFA作監(jiān)測比單用原蟲率更為靈敏，同時也證實居民帶蟲率與居民抗體水平有一定關(guān)系，隨居民帶蟲率下降抗體水平及抗體陽性率亦下降。

至今年為止，五年來我所已供應(yīng)各抗原片約4萬余張，抗人IgG熒光抗體500余瓶，保證了我省近年來開展約10萬人次的調(diào)查，使在瘧疾流行病學調(diào)查、考核防治效果、清查病灶點、監(jiān)測瘧疾動態(tài)等方面積累了大量數(shù)據(jù)，對指導今后防治、更深入普及使用這一診斷技術(shù)奠定了良好基礎(chǔ)。

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